Związek chronicznej boreliozy z allelami HLA-DR4 i HLA-DR2 ad

Badanie zostało zatwierdzone przez Komitet Dochodzeń Ludzkich Uniwersytetu Yale i uzyskano świadomą zgodę od każdego pacjenta. Wszyscy pacjenci w obu fazach badania byli biały i pochodzili z pięciu stanów na północno-wschodnim wybrzeżu Stanów Zjednoczonych. Ich wiek wynosił od 7 do 72 lat (mediana, 34 lata); 72 mężczyzn i 58 kobiet. Wszystkie miały podwyższone miana przeciwciał IgM lub IgG w surowicy do B. burgdorferi, zmierzone jak opisano wcześniej. 9, 10 Dla porównania przebadano 86 normalnych osobników, 53 mężczyzn i 33 kobiety, w wieku od 18 do 54 lat (mediana, 31 ), w New York University Medical School. U tych osób wykonano typowanie HLA w tym samym czasie i przy użyciu tych samych odczynników jak u pacjentów z boreliozą.
Procedury typowania HLA
Specyficzność HLA-A, B, C, DR i DQ zidentyfikowano za pomocą standardowego testu mikrocytotoksyczności limfocytów11 przy użyciu panelu lokalnych i wymienianych alloantizerów.12 U pięciu pacjentów z przewlekłym boreliozowym zapaleniem stawów, którzy zostali sklasyfikowani jako HLA-DR4 lub HLA -DR2, komplementarny DNA łańcucha DR . został zsekwencjonowany. U tych pacjentów wyizolowano 5 .g całkowitego RNA z jednojądrzastych komórek krwi obwodowej, a syntezę nici DNA komplementarnego DNA przeprowadzono z użyciem odwrotnej transkryptazy w obecności starterów (5 , kodony -12 do -6; 3 , kodony od 105 do 112) .13 Po dodaniu polimerazy Taq przeprowadzono 25 cykli amplifikacji reakcji łańcuchowej polimerazy w termocyklerze DNA (Perkin-Elmer-Cetus), jak opisano wcześniej.14 Zamplifikowany produkt był przebiega na żelu, a odpowiedni prążek wklonowano do plazmidu pUC18, stosując miejsca restrykcyjne enzymu Sstl i SmaI. Po transfekcji Escherichia coli XL1-blue wybrano i hodowano od 10 do 50 kolonii z insertami. Konstrukty scharakteryzowano najpierw trawieniem enzymem restrykcyjnym, a następnie sekwencjonowano metodą dideoksy.13
Analiza statystyczna
Do analizy statystycznej porównano typy HLA u pacjentów lub u osób zdrowych w tabelach dwa na dwa , z których obliczono iloraz szans. Wyraziliśmy iloraz szans pod względem ryzyka względnego, co jest zwyczajowe w tej dziedzinie. Statystyczne znaczenie względnego ryzyka obliczono za pomocą dokładnego testu Fishera (dwustronnego). Próbując unieważnić możliwość przypadkowego powiązania z danym allelem, wartości P pomnożono przez liczbę specyficzności badanych w każdym locus: siedem dla DR i trzy dla DQ.
Wyniki
Spośród 75 wybranych pacjentów z różnymi objawami choroby z Lyme, których testowaliśmy w pierwszej fazie badania, częstość występowania specyficzności HLA-A, B, C i D u osób z samą rumieniem wędrującym, zapaleniem opon mózgowych lub zapaleniem stawów była podobna do te z 86 normalnych podmiotów. Jednakże, gdy grupa ze stawem była uwarstwiona zgodnie z czasem trwania zapalenia stawów, 4 z 9 pacjentów z przewlekłym zapaleniem stawów (44 procent), ale żaden z 16 pacjentów, którzy mieli krótszy okres artretyzmu, nie miał specyficzności HLA-DR4. W celu zwiększenia wielkości grupy zapalenia stawów i uniknięcia błędu selekcji, następnie przebadaliśmy wszystkich 55 pacjentów z zapaleniem stawów z Lyme, których widzieliśmy podczas kolejnego okresu 1/2 roku, w momencie rozpoczęcia badań antybiotykowych.
[więcej w: lepkość krwi, wiązki kolateralne, ból w górnej części klatki piersiowej ]