Wpływ prawastatyny, swoistego inhibitora reduktazy HMG-CoA, na wątrobowy metabolizm cholesterolu ad

Kobiety w grupie leczonej prawastatyną były po menopauzie lub stały się sterylne podczas operacji; niemożność zajścia w ciążę była jedynym kryterium wyboru kobiet do leczenia. Grupa kontrolna, w której skład wchodziło osiem kobiet po menopauzie, miała być dwukrotnie większa od grupy prawastatyny, aby uzyskać wiarygodny zakres wartości kontrolnych dla testów enzymatycznych.16 W grupie prawastatyny, rutynowe próbki krwi uzyskano po całonocnym poście trzykrotnie: przed podaniem leku i po tygodniu i trzech tygodniach leczenia (tj. w dniu poprzedzającym operację). W przypadku grupy kontrolnej zgłasza się dane uzyskane w dniu poprzedzającym operację; Wartości lipoprotein zostały określone tylko u 12 z 20 pacjentów. Ostatnia dawka prawastatyny została pobrana o godzinie 21:00 w dniu poprzedzającym operację. Otrzymano świadomą zgodę od każdego pacjenta, a badanie zostało zatwierdzone przez Komisję Etyczną w Szpitalu Uniwersyteckim w Huddinge.
Eksperymentalne procedury
Wszystkie operacje zostały przeprowadzone między 8 a 9 rano po 12-godzinnym poście. Znieczulono standardowe znieczulenie indukcyjne za pomocą tiopentalnego i ciągłego leczenia podtlenkiem azotu, diazepamem i fentanylem.16 Natychmiast po otwarciu jamy brzusznej pobrano próbkę biopsyjną (2 do 4 g) z lewego płata wątroby i umieszczono w lodowato zimny środek homogenizujący; przygotowanie mikrosomów rozpoczęto w laboratorium w ciągu 10 minut. Niewielką próbkę wątroby badano histologicznie.
Przewód torbielowaty został zaciśnięty, a żółć pęcherzyka żółciowego uzyskano przez aspirację. Jeśli pęcherzyk żółciowy nie działał, jego zawartość nie była analizowana. Żółć wątrobową uzyskano od sześciu pacjentów leczonych prawastatyną i dziewięciu kontroli przez nakłucie wspólnego przewodu żółciowego cienką igłą. Cholecystektomię wykonano bez żadnych powikłań. Wszystkie testy biochemiczne przeprowadzono bez wiedzy o stanie każdego pacjenta w odniesieniu do leczenia prawastatyną.
Testy
Poziom cholesterolu i triglicerydów w osoczu oznaczano metodami enzymatycznymi (Boehringer Mannheim, Mannheim, Republika Federalna Niemiec). Lipoproteiny analizowano przez połączenie ultrawirowania i strącania 17, 18 W skrócie, plazmę wirowano przy 35 000 obrotów na minutę przez 18 godzin w temperaturze 4 ° C w ultrawirówce Contron Centrikon T-2060 wyposażonej w wirnik 45.6 (gęstość 1,006 g na mililitr). ). Probówki pokrojono w plasterki, a frakcję supernatantu i infranatant analizowano na zawartość cholesterolu i triglicerydów. Część infranatanu potraktowano kwasem fosforowolframowym w celu wytrącenia białek zawierających apolipoproteinę B i analizowano jak opisano powyżej. Do analizy apolipoprotein AI i B zastosowano metody immunoturbidometryczne (Orion Diagnostica, Espoo, Finlandia). Stężenie lathosterolu i wolnego cholesterolu w surowicy krwi mierzono za pomocą izotopowej rozcieńczonej spektrometrii mas po dodaniu wzorców wewnętrznych znakowanych 2H.19
Próbki biopsji wątroby rozdrobniono i homogenizowano w homogenizatorze Potter-Elvehjem z luźnym tłuczkiem teflonowym, w dziewięciu objętościach 50 mM buforu TRIS-chlorowodorek, pH 7,4, zawierającego 0,3 M sacharozy i 50 mM chlorku sodu lub 50 mM sodu. fluorek (oznaczenie reduktazy HMG-CoA), 10 mM ditiotreitolu, 10 mM EDTA (oznaczenia 7a-hydroksylazy cholesterolu i HMG-CoA) lub mM EDTA (test ACAT)
[więcej w: włoski wydzielnicze, wiązki kolateralne, odruch ze ścięgna achillesa ]