Transpolacental Passage of Insulin u kobiet w ciąży z cukrzycą insulinozależną – jej rola w makrosomii płodowej czesc 4

Po liofilizacji wszystkie frakcje odtworzono w buforze radioimmunologicznym i poddano testowi radioimmunologicznemu na insulinę. Wzorzec wewnętrzny
Aby określić skuteczność procedury stosowanej do pomiaru insuliny, 0,43 pmol półsyntetycznego analogu ludzkiej insuliny (Hum [SerB24], hojny dar od Dr H. Tagera, University of Chicago) dodano do próbki surowicy przed inkubacją z trifluorooctą kwas. Objętość elucji dla tego preparatu insuliny była znacząco różna od objętości naturalnej ludzkiej, świńskiej i bydlęcej insuliny, tak że nie zakłócała wykrywania i oznaczania ilościowego naturalnej insuliny w wysokosprawnej chromatografii cieczowej. Ustalenie ilości półsyntetycznego analogu odzyskanego po wysokosprawnej chromatografii cieczowej pozwoliło nam obliczyć odzysk insuliny w każdej próbce surowicy. Średnie (. SD) odzyskiwanie wzorca wewnętrznego (Hum [SerB24]) z próbek surowicy wynosiło średnio 50,1 . 10,9 procent. Wszystkie wartości immunoreaktywności insuliny po wysokosprawnej chromatografii cieczowej skorygowano dla tego odzyskiwania.
Oznaczenie radioimmunologiczne insuliny i insuliny-przeciwciało
Do pomiaru insuliny wykorzystano równowagowy test radioimmunologiczny z podwójnym przeciwciałem. Pozostałość z liofilizowanego buforu do elucji w każdej wysokosprawnej frakcji chromatografii cieczowej (0,3 ml) nie hamowała znacząco wiązania insuliny znakowanej 125I z świnką świnką morską. surowica insulinowa. Naturalne insuliny (bydlęce, ludzkie i świńskie) miały taką samą skuteczność w hamowaniu wiązania insuliny znakowanej 125I do przeciwciała anty-insuliny zastosowanego w teście; w związku z tym frakcje, które miały zawierać te analogi, zmierzono względem krzywej standardowej dla insuliny świńskiej. Inhibicja wiązania insuliny wyznakowanej 125I do przeciwciała insuliny stosowanego w teście przez półsyntetyczny analog Hum [SerB24] różniła się od wiązania insuliny bydlęcej, ludzkiej i świńskiej, a zatem frakcje przewidywały, że zawierają półsyntetyczny analog oznaczono ilościowo za pomocą homologicznej krzywej standardowej. Czułość testu dla natywnej insuliny wynosiła 21 do 36 pmol na litr.
Przeciwciała insuliny w surowicy matczynej i pępowinowej oraz płynie owodniowym zmierzono w dwóch powtórzeniach metodą Palmer i in. z niewielkimi modyfikacjami.12 Wyniki wyrażono jako procent insuliny znakowanej 125I (mono-jodowana insulina ludzka A14, Amersham, Arlington Heights, Ill, 6,0 fmol na probówkę, 1900 Ci na milimol) dodana na probówkę. Średni (. SD) poziom wiązania insuliny znakowanego 125I określony tą metodą wynosił 0,14 . 0,02% w surowicy 19 zdrowych osób, a średnia aktywność insuliny-przeciwciała w płynie owodniowym od 15 zdrowych ciężarnych kobiet wynosiła 0,06 . 0,08% .
Scatchardową analizę wiązania przeciwciała anty-insuliny w surowicy pępowinowej przeprowadzono przy użyciu deinsulinizowanej surowicy pępowinowej13. Przeprowadzono dezynfekcję przez inkubację ml surowicy z 1,25 ml 0,12 M kwasu chlorowodorowego i 0,5 ml węgla drzewnego powleczonego dekstranem. pięć minut w temperaturze pokojowej, a następnie zobojętniono 1,25 ml 0,12 M wodorotlenku sodu. Węgiel drzewny oddzielano od surowicy przez dwa kolejne wirowania po 30 minut przy 2000 x g
[hasła pokrewne: anemia megaloblastyczna, ból w górnej części klatki piersiowej, komórki przepustowe ]