Infiltracja neointimy i rurkowo-śródmiąższowa przez mezenchymalne komórki biorcy w przewlekłym odrzuceniu alloprzeszczepu nerkowego cd

Fragment pHY2.1 hybrydyzuje z powtórzeniem tandemowym 2000 kopii na długim ramieniu chromosomu Y.17 Preparaty odwadniane są w etanolu, suszone powietrzem, a następnie inkubowane z roztworem hybrydyzacyjnym zawierającym 2 x sól fizjologiczną cytrynianu sodu (1 x sól fizjologiczna cytrynianu sodu 0,15 M chlorku sodu i 0,015 M cytrynianu sodu), 50% formamidu, 10% siarczanu dekstranu, mg DNA plemników łososia na mililitr i .g sondy znakowanej digoksygeniną na mililitr. Denaturację przez 10 minut w 72 ° C śledzono przez inkubację przez noc w 37 ° C. Następnego ranka niezwiązaną sondę przemyto 2 x solanką cytrynianu sodu w 37 ° C. Kolejne etapy detekcji przeprowadzono jak opisano poprzednio.18 Jądra wybarwiono kontrastowo za pomocą zieleni metylowej, następnie szkiełka nakrywano lekkim olejem mineralnym, aby zachować składniki zarówno rozpuszczalne w rozpuszczalniku, jak i rozpuszczalne w wodzie. Analiza statystyczna
Każde jądro zabarwione na niebiesko zostało zinterpretowane jako wskazujące na komórkę mezenchymalną (miofibroblast lub komórkę mięśni gładkich), jeśli otoczono ją czerwoną barwioną .-aktyną mięśni gładkich. Barwienie chromosomu Y uważano za pozytywne, jeśli wykryto wyraźny ciemno-niebiesko-czarny sygnał w jądrze. Analizę wykonał obserwator, który nie był świadomy historii pacjentów. Obecność lub nieobecność .-aktyny mięśni gładkich i chromosomu Y odnotowano dla każdego jądra policzonego w neointimy, okołonaczyniowej adventitii i śródmiąższowej śródmiąższu, w sumie do 1000 komórek. Różnice między grupami analizowano za pomocą dwustronnego niesparowanego testu t.
Wyniki
Przebadaliśmy 14 próbek z biopsji nerki z typowymi zmianami naczyniowymi i śródmiąższowymi w przypadku przewlekłego odrzucenia. Dwa osobniki pochodziły od samic biorców allograftu od dawcy płci żeńskiej i od mężczyzn biorców allograftu od dawcy-mężczyzny, cztery próbki pochodziły od kobiet biorców allograftu od dawcy-mężczyzny, a sześć próbek od mężczyzn biorców allograftu z żeńska dawczyni. Podstawową przyczyną lub przyczynami transplantacji była cukrzyca u sześciu pacjentów, zapalenie kłębuszków nerkowych w sześciu, zespół policystycznych nerek w czterech, nadciśnieniowe stwardnienie rozsiane w trzech, przewlekłe odmiedniczkowe zapalenie nerek w dwóch, uropatia zaporowa w jednym i nieznana choroba w jednym.
Tabela 1. Tabela 1. Procent komórek mezenchymalnych dodatnich dla ciała Y-chromosomu. Wyniki podsumowano w Tabeli 1. W przeszczepach nerkowych z czterech pacjentek z dawcami płci męskiej odkryliśmy wyraźne dowody naciekania neointimy, przydanki i śródmiąższu przez mezenchymalne komórki pochodzenia dawcy (męskie). Te aloprzeszczepy również wykazały populację męskich komórek mezenchymalnych.
Rycina 1. Ryc. 1. Wyniki kombinowanego immunobarwienia a-aktyny mięśni gładkich (czerwona cytoplazma) i hybrydyzacji in situ dla ciała Y-chromosomu (czarny sygnał jądrowy) (× 325). W Panelu A, próbka z allografem nerkowym, w której zarówno dawcy jak i biorcy byli płci męskiej, wykazywała sygnał chromosomu Y w komórkach rurkowych (czarna strzałka) i śródmiąższu (białe strzałki). Niektóre komórki nie wykazywały wybarwienia chromosomu Y, ponieważ ciało chromosomu Y nie było zawarte w tej sekcji
[podobne: komórki inicjalne, odruch ścięgna achillesa, komórki gruczołowe ]
[hasła pokrewne: włoski wydzielnicze, komórki przepustowe, odczynnik millona ]